Manual práctico de Trombosis y Hemostasia de la SETH

I . E L L A B O R A T O R I O D E H E M O ST A S I A — 4 2 — Disponemos de la capacidad de acceder a información genética de forma masiva, fiable, económica y rápida, y esta accesibilidad está revolucionando el diagnóstico molecular. Sin embargo, las nuevas técnicas de diagnóstico molecular tam- bién tienen aspectos negativos que deben conocerse, y que se tratan en este capítulo. DIAGNÓSTICO MOLECULAR Clásicamente, el diagnóstico molecular se ha realizado a tra- vés de un estudio genético dirigido con diferentes opciones metodológicas dependiendo del tipo de alteración molecular o del material genético de partida que estemos analizando: a. Las alteraciones genéticas comunes como los poli- morfismos protrombóticos (FV Leiden o protrombina G20210A) o alteraciones genéticas muy frecuentes en ciertas patologías (como la inversión del intrón 22 en hemofilia A), o en los casos de estudios familiares de alteraciones genéticas ya identificadas en el probando, el análisis molecular se puede realizar de forma dirigida a la variante genética específica. Los sistemas de genoti- pado suelen ser rápidos, económicos y muy específicos. Existen paneles de marcadores genéticos relacionados con la hemostasia que permiten un genotipado simultá- neo de diferentes alteraciones genéticas (por ejemplo, trombofílicas). b. Si el desorden que estamos estudiando puede estar causado por gran variedad de alteraciones genéticas dispersas en un gen, la opción más empleada actual- mente es la secuenciación (normalmente de exones y regiones flanqueantes) del gen candidato que define el fenotipo intermedio (por ejemplo el gen SERPINC1 en pacientes con deficiencia de antitrombina). Esta apro- ximación genera una tasa de resultados positivos que no suele superar el 80 % de los casos con un fenotipo intermedio bien caracterizado. Esta metodología es más compleja, cara y especializada, por lo que no está gene- ralizada en todos los hospitales. c. Las grandes anomalías genéticas (grandes deleciones, duplicaciones, inversiones o translocaciones) suelen ser raras en trastornos de la hemostasia, salvo ciertas ex- cepciones. Estas alteraciones requieren métodos más específicos y especializados de detección: Multiplex Liga- tion-dependent Probe Amplification (MLPA), citogenética, hibridación in situ fluorescente (FISH); arrays de CGH (hibridación genómica comparada), etc. d. El estudio del transcriptoma puede aportar informa- ción destacada, no solo identificar alteraciones mo- leculares; también puede ayudar a descifrar el meca- nismo molecular implicado y puede llegar a tener im- plicaciones pronósticas. Este análisis se puede realizar de forma dirigida a ciertos ácidos ribonucleicos (ARN) candidatos (tanto codificantes como no codificantes, como los mi-ARN), a grupos de transcritos, o al con- junto de ARN. e. La metodología de análisis genético masivo (paneles de genes, exoma, genoma completo o ARN-seq) es, sin duda, el futuro en el diagnóstico molecular, también en hemostasia. Estos métodos han identificado nuevas alteraciones y mecanismos moleculares implicados en diferentes patologías. Se trata de aproximaciones cuya máxima eficacia en términos de coste (tanto de tiempo como económico) como de interpretación de resulta- Figura 1. Evolución del coste y capacidad de secuenciación. Coste del genoma (millones de $) 100 10 1 0,1 0,01 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2011 2012 2013 2014 2015 2016 2010 Secuencia por carrera (Kb) 1E + 16 1E + 14 1E + 12 1E + 10 10.000.000 1.000.000 10.000 100 1 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013 2014 2015 2016