Manual práctico de Trombosis y Hemostasia de la SETH

— 4 5 — 3 . D i a g n ó s t i c o m o l e c u l a r e n l a h e m o s t a s i a La comparativa entre los nuevos sistemas de secuencia- ción y la secuenciación clásica empleada hasta la fecha se muestra en la tabla II. Las ventajas de la secuenciación masiva indican que estos sistemas serán los que en un futuro más cercano que lejano se empleen para el diagnóstico molecular de todas las enferme- dades, incluidos los desórdenes de la hemostasia. De hecho, lo ideal será disponer de la información global del genoma de cada paciente, que se analizará atendiendo a las manifesta- ciones clínicas o resultados analíticos que se recojan en cada momento. Esta aproximación, que incluso en la actualidad ya no supone un coste desmedido (1.000 €), ahorrará multitud de estudios genéticos. No obstante conviene destacar las limitaciones de esta prometedora metodología de estudio molecular: 1. En primer lugar, la tasa de errores de secuenciación, aunque se ha mejorado considerablemente, precisa de validación empleando justamente la tecnología de se- cuenciación clásica. 2. En segundo lugar, existen algunas alteraciones molecu- lares, cada vez menos, que no son fáciles de identificar con los sistemas de secuenciación masiva. 3. En tercer lugar, y quizás la limitación más importante, los sistemas de secuenciación masiva (hablamos de genoma o exoma) identifican miles de alteraciones Figura 2. Secuenciación masiva, posibilidades, fortalezas y debilidades. Factores ambientales Factores ambientales Riesgo de enfermedad compleja Reducen riesgo Incrementan riesgo Población Protectoras Beningnas Patogénicas Probables protectoras Problables beningnas Probables patogénicas Variaciones genéticas Tabla II Comparativa entre la secuenciación Sanger y la secuenciación masiva (NGS) Sanger NGS Estrategia Reacciones separadas para los distintos exones de un solo gen Una reacción para el análisis simultáneo de varios genes Muestras Clones, amplicones de PCR Librerías de DAA (o cADN), genoma completo Longitud de lectura Kb Gb Datos Una lectura/muestra Miles-millones de lecturas/muestra Resolución Muchas moléculas en la misma lectura Una molécula por lectura Ventaja Elevada precisión Buena relación coste/ beneficio Análisis simultáneo y masivo Desventaja Caro y consume tiempo Análisis de gran cantidad de datos PCR: reacción en cadena de la polimerasa.