XXXIII Congreso Nacional de la Sociedad Española de Trombosis y Hemostasia

XXXIII Congreso Nacional de la Sociedad Española de Trombosis y Hemostasia 104 El inconveniente de las transfusiones plaquetarias reiteradas es que los pacientes acaban desarrollando aloanticuerpos frente a molé- culas del HLA o de las propias proteínas del complejo GPIB-V-IX (refractariedad plaquetaria). Además, los preparados plaquetarios suelen proceder de un “pool” de varios donantes, aumentado así las posibilidades de este rechazo inmunológico. Por eso se recomien- da, la transfusión de plaquetas procedentes de un solo donante con un HLA compatible y con depleción leucocitaria (17). El trasplante de células madre hematopoyéticas (HSCs) a partir de donantes de idéntico HLA se ha probado con éxito en varios pacientes de SBS (19,20). Se justificó esta técnica porque dichos pacientes habían desarrollado refractariedad plaquetaria y tenían familiares con idéntico HLA que sirvieron como donantes compatibles. Como el SBS es un defecto genético que afecta a un solo gen, este desorden podría ser un futuro candidato para la terapia génica de reemplazo. La restauración del gen mutado en las HSCs de estos pacientes y su posterior autotrasplante supondría un avance extraordinario en el tratamiento de esta enfermedad. A pesar de los avances en modelos animales de enfermedad de SBS hasta el momento no se habían generados modelos humanos de SBS donde probar tratamientos basados en terapia génica. El modelo ideal serían las células madre hematopoyéticas (HSCs) de pacientes de SBS, pero estas no pueden ser mantenidas in vitro por largos periodos de tiempo debido a su rápida diferenciación o muerte. Por el contrario, las iPSC tienen una capacidad prolife- rativa ilimitada y un potencial para diferenciarse a cualquier tipo celular del cuerpo, incluidas las HSCs, haciendo estas células una fuente excepcional de tejido humano que contiene el desorden genético causante de la enfermedad (2,21). Por tanto, las iPSC derivadas de pacientes de SBS se presentan como un modelo de enfermedad excelente para analizar el impacto que nuevas tera- pias, como la terapia génica, pudieran tener en el tratamiento de la enfermedad humana. En colaboración con el grupo liderado por el Dr. Vicente del Servicio de Hematología y Oncología Médica del Hospital Gene- ral Universitario Morales Meseguer de Murcia hemos generado los primeros modelos celulares del SBS (iPSC-SBS) mediante reprogra- mación de células mononucleares de sangre periférica de pacientes con mutaciones en el gen GPIX (22-24). Para validar estas herra- mientas necesitaremos protocolos de diferenciación megacariocítica partiendo de iPSCs. A día de hoy muy pocos grupos en el mundo hemos diferenciado iPSCs o células embrionarias humanas (hESCs) hacia megacariocitos y plaquetas humanas de una manera eficiente. El grupo del Dr. Eto reportó la producción de megacariocitos y plaquetas a partir de hESCs e iPSCs usando un sistema optimizado de co-cultivo en líneas celulares estromales de origen animal OP9 y C3H10T1/2 (25,26). Posteriormente, el grupo del Dr. Lanza publicó un primer protocolo en dos fases, primero en EBs y luego sobre OP9 (27). Basándonos en este protocolo y en colaboración con el Dr. Martín (GENyO), hemos desarrollado un protocolo de diferencia- ción megacariocítico muy efectivo partiendo de hESCs que emplea la sobreexpresión de SCL/TAL1 como potenciador de la producción de megacariocitos y plaquetas in vitro (28). En la presente comunicación describiremos los modelos celulares humanos de SBS (iPSC-SBS) generados en nuestro laboratorio que nos van a permitir en primer lugar entender la biología de esta patología y en segundo lugar para probar nuevas herramientas (vectores lentivirales y vectores de edición génica basados en CRISPR/Cas9) de rescate genético de las mutaciones en el gen GPIX . Bibliografía 1. Thomson JA, Itskovitz-Eldor J, Shapiro SS, Waknitz MA, Swiergiel JJ, Marshall VS, et al. Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts. Science 1998;282:1145-7. 2. Takahashi K, Tanabe K, Ohnuki M, Narita M, Ichisaka T, Tomoda K, et al. Induction of pluripotent stem cells from adult human fibro- blasts by defined factors. Cell 2007;131:861-72. 3. Takahashi K, Yamanaka S. A decade of transcription factor-mediated reprogramming to pluripotency. Nat RevMol Cell Biol 2016;17:183-93. 4. Eto K, Kunishima S. Linkage between the mechanisms of thrombo- cytopenia and thrombopoiesis. 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