XXXIII Congreso Nacional de la Sociedad Española de Trombosis y Hemostasia

XXXIII Congreso Nacional de la Sociedad Española de Trombosis y Hemostasia 126 Figura. 3. Comparación de las estructura modelada in silico para la AT mutada en comparación con la AT silvestre. A. Estructura de la AT WT . El extremo C-terminal que cambia en la AT MUT se señala en color magenta, al igual que los 6 residuos de Cys. Se muestran también las tres lámina β (A-C, en azul, amarrillo y verde, respectivamente) y las nueve hélices α (A-I, en gris oscuro). El centro reactivo se muestra en rojo. B. Modelado de la ATMUT gene- rado por Swiss-Model y Chimera. La estructura de la AT MUT se representa gráficamente (amarillo), al tiempo que se hibrida con la AT WT (azul). La AT MUT presentaba el giro β s4B-s5B y el extremo C-terminal más cortos que la AT WT (flechas). C. Comparación de las interacciones intracatenarias por puentes de hidrógeno y puentes disulfuro en la zona de la mutación. La AT MUT aparentemente puede establecer interacciones por puentes de hidrógeno simila- res a los de la AT WT . En la AT MUT no se modelaba la Cys429 MUT . No obstante, su localización sería muy similar a la de la Cys430 WT , enfrentada a la Cys247 con la que forma un puente disulfuro. Sin embargo, la cadena lateral de la Leu428 en la AT MUT se interpone en la interacción entre Cys247 y Cys429 MUT (AT: antitrombina; AT WT : AT silvestre; AT MUT : AT mutada; N-ter y C-ter: extremos N- y C-terminales). CO-136  Papel de la glicosilación en la función y niveles plasmáticos del FXII mostrados por el estudio de pacientes con trastorno de glicosilación congénita (CDG) López-Gálvez R. 1 , de la Morena-Barrio M. E. 1 , Salloum-Asfar S. 1 , Miñano A. 1 , Serrano M. 2 , Pérez-Dueñas B. 2 , Altisent C. 3 , Vicente V. 1 , Corral J. 1 1 Servicio de Hematología y Oncología Médica. Hospital General Universitario Morales Meseguer. Centro Regional de Hemodonación. Universidad de Murcia. IMIB-Arrixaca, CIBERER, Murcia. 2 Departamento de Neurología Pediátrica. Departamento de Bioquímica Clínica. Instituto de Investigación Pediátrica- Hospital Sant Joan de Déu. CIBERER. Barcelona. 3 Unidad de Hemofilia. Hospital Universitario Vall d’Hebron. Barcelona Introducción: El FXII, como proteína de la fase de contacto de la coagulación, es capaz de activarse por interacción con superficies cargadas negativamente. Por ello, distorsiones del potencial electros- tático de esta proteína, afectado significativamente por la glicosilación, podrían provocar cambios en la activación de la coagulación y de la respuesta inflamatoria. De hecho, la mutación p.Thr309Lys asociada con una O-glicosilación defectuosa, facilita la activación del FXII y causa angioedema tipo III, sin consecuencias en hemostasia. Los tras- tornos de glicosilación congénitos (CDG) son desórdenes raros aso- ciados a hipo-N-glicosilación en los que se describen complicaciones vasculares. Dado que el FXII presenta dos sitios de N-glicosilación, nuestro objetivo fue analizar el estado de glicosilación del FXII en pacientes CDG, y su potencial efecto patológico. Material y métodos: El estudio se realizó en 23 pacientes caracterizados clínica-biológica y molecularmente de CDG. La actividad funcional y características electroforéticas de antitrom- bina, FXII y FXI se determinaron con sistemas cromogénicos/ coagulométricos y Western Blot . Las formas hipoglicosiladas de transferrina se determinaron por HPLC. Estudios básicos de glicó- mica implicaron el tratamiento del plasma con N-glicosidasa F. La activación del FXII plasmático se realizó con sílica micronizada o dextrán sulfato (DXS). Resultados: Los pacientes CDG no presentaban deficiencia de FXII en plasma tanto en su actividad funcional (125 ± 42%) como en niveles antigénicos (Figura 1A) . Sin embargo, como ocurre con la mayoría de proteínas hepáticas, se observó un aumento muy sig- nificativo de una glicoforma de FXII hipoglicosilada. Al comparar la movilidad electroforética con una muestra control tratada con N-glicosidasa F, la forma hipoglicosilada detectada en CDGs con- tiene un solo N-glicano, sin observarse formas aglico-FXII (Figura 1B) . Los niveles de la glicoforma se asociaron directamente con el grado global de hipoglicosilación. No detectamos formas activadas de FXII en las muestras basales de los pacientes CDG. La forma hipoglicosilada se activa de forma similar a la forma con 2 N-glica- nos cuando se emplea sílica, pero parece menos activable con DXS. Destacamos que independientemente del activador, solo se detectó una forma de FXIIa (Figura 1C) , lo que indica que todo el FXII hipoglicosilado tiene el N-glicano en la cadena pesada (Asn414). Conclusiones: El FXII de pacientes CDG presenta una notable hipoglicosilación. Sin embargo, este defecto no afecta a la secre- ción dado que los niveles plasmáticos de FXII no se ven reducidos. No obstante, la ausencia de aglico-FXII en plasma de CDG y el hecho de que todas las formas hipoglicosiladas son homogéneas (con N-glicosilación en Asn230), sugiere que la glicosilación de esta posición es clave en el correcto plegamiento y/o secreción del