XXXIII Congreso Nacional de la Sociedad Española de Trombosis y Hemostasia

XXXIII Congreso Nacional de la Sociedad Española de Trombosis y Hemostasia 122 cativa entre las pacientes que recidivaron y las que no ( Σ VAS: 157 vs 310; p<0.001; Σ EHP30: 146 vs 385; p<0.001). En las pacientes que recidivaron, se observó una reducción significativa en los niveles de VEGF-A (251 ± 59 vs. 136 ± 48 pg/mg; p = 0,016) y PAI-1 (5,10±1,31 vs. 2,91 ± 0,97ng/mg; p = 0,05). Adicional- mente, se observó un aumento significativo en los niveles de miR-411-5p (0,74 ± 0,13 vs 1,11 ± 0,21; p < 0.05) y -424-5p (0,45 ± 0,05 vs. 0,95 ± 0,15; p = 0.002). El CA125 mostró mayo- res niveles en las pacientes que recidivaron (30,27 ± 29,36 vs. 53,20 ±3 3,83; p = 0.035). Las variables Σ EHP-30, miR-411-5p -424-5p se incluyeron en el modelo predictivo, siendo el área bajo la curva obtenida de 0.93. Conclusiones: La combinación de marcadores clínicos pre-quirúrgicos ( Σ VAS y Σ EHP-30), biomarcadores en sangre periférica (CA-125) y en endometrio eutópico (miR-411-5p y -424-5p) permite conformar un modelo no invasivo predictor de recidiva en endometriosis individualizado para cada pacien- te, con potencial aplicabilidad en la toma de ciertas decisiones clínicas. Financiación: ISCIII y FEDER “Una manera de hacer Euro- pa” (PI14/01309), Becario FETH 2017-18. CO-133  Estudio del plegamiento de la antitrombina a través de la n-glicosilación Águila S. 1 , Luengo-Gil G. 1 , Bohdan N. 1 , Espín S. 1 , Vicente V. 2 , Corral J. 2 , Martínez-Martínez I. 2 1 Servicio de Hematología y Oncología Médica. Hospital General Universitario Morales Meseguer. Centro Regional de Hemodonación. Universidad de Murcia. IMIB-Arrixaca. Murcia. 2 Centro de Investigación Biomédica en Red de Enfermedades Raras (CIBERER). Instituto de Salud Carlos III (ISCIII). Madrid Introducción: La antitrombina, como miembro de las serpi- nas, tiene una especial sensibilidad conformacional que le hace propensa a la polimerización durante el plegamiento intracelular, como consecuencia de alteraciones genéticas o ambientales. Sin embargo, el mecanismo de polimerización es aún desconocido. La antitrombina es además una glicoproteína y la N-glicosilación es una modificación postraduccional que juega un papel clave en el plegamiento de muchas proteínas. Objetivo: Usar la N-glicosilación como herramienta para estudiar el plegamiento de la antitrombina, basándonos en la hipótesis de que ambos procesos pueden afectarse mutuamente. De manera que, aquellas regiones que estén plegadas no se gli- cosilarán y aquellas regiones que se glicosilen pueden afectar al plegamiento y/o funcionalidad. Métodos: Expresión recombinante de diferentes mutantes de antitrombina creados mediante mutagénesis dirigida en contexto beta (con 3 glicanos). Análisis de los distintos mutantes mediante tratamiento con Endoglicosidasa H (EndoH) (solo digiere glica- nos inmaduros con alto contenido en manosas), electroforesis y western blot. Resultados: Generamos 18 mutantes diferentes que integra- ban una nueva secuencia de N-glicosilación en cada una de las hebras beta de la estructura de la proteína (Tabla I y Figura 1) . Solo 8 mutantes se glicosilaron y se secretaron al medio extra- celular, aunque únicamente 3 de ellos mantenían la actividad anticoagulante. Dos mutantes se secretaban a muy bajos niveles. Todos los mutantes glicosilados polimerizaban y el glicano extra era sensible al tratamiento con EndoH, excepto en 2 casos. Curio- samente, 2 de los mutantes que no se glicosilaban también eran sensibles al tratamiento con EndoH. En el caso de los mutantes P172N/D174T y L146T, la polimerización y los bajos niveles de secreción detectados son provocados por la mutación ya que no se introduce ningún glicano extra. La mayoría de las mutaciones en la hoja A inducen polimerización y en la hoja B las mutaciones afectan claramente a los niveles de secreción. Interesantemente, 2 de los 3 mutantes en la hoja C se glicosilan, se secretan y son funcionales. Conclusiones: Las mutaciones que crean nuevos sitios de gli- cosilación en las hebras s1A, la región final de la hebra s2A, la hebra s5A, la región final de la hebra s6A, las hebras s1B, s4B, y s3C no se glicosilan, lo que sugiere que el plegamiento de estas hebras precede a la glicosilación. Además, estas mutaciones en su mayoría impiden la función inhibitoria de la antitrombina, demos- trando la importancia de estas regiones en la estructura y función de la antitrombina. En el caso de todos los mutantes glicosilados, el glicano extra no sigue la maduración correcta a lo largo del aparato de Golgi, afectando en algunos casos a la accesibilidad de los otros glicanos presentes en la antitrombina. En resumen, nuestros datos sugieren que las hojas A y B son cruciales para el plegamiento ya que la mayoría de las mutaciones que generan nuevos sitios de glicosilación en estas zonas provocan polimerización y/o una baja secreción. Estos resultados amplían nuestro conocimiento sobre el plegamiento de la antitrombina y pueden ayudar al diseño racional de fármacos que impidan la polimerización. Figura 1. Representación estructural de las mutaciones generadas en las hebras beta de la antitrombina. Las imágenes fueron realizadas con Pymol usando el molde PDB: 1t1fA.