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Comunicaciones orales
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dina A) y un inhibidor (KT-5720) de la fosforilación de la FLNA
en el residuo Ser2152 permitieron demostrar que esta fosfori-
lación promueve la unión de la FLNA con STIM1 y que dicha
asociación provoca una disminución del flujo de Ca2+ mediado
por ECC.
Conclusión:
La fosforilación de la FLNA en el residuo Ser2152
y su asociación con STIM1 actúa como un freno al flujo de Ca2+
extracelular mediado por la ECC. Trabajo financiado por el MI-
NECO (BFU2013-45564-C2-1-P), Junta de Extremadura-FEDER
(GR15029) y el programa Juan de la Cierva (JCI-2012-12934).
Bibliografía
1. Sayner SL, et al. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 2011;
301:L117-124.
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3. Lacruz RS, Feske S. Ann NY Acad Sci 2015;1356:45-79.
CO-163
Mecanismos reguladores de la reactividad
plaquetaria neonatal: papel de los
receptores plaquetarios con dominios ITAM
e ITIM
Palma-Barqueros V. (1), Sánchez-Méndez J. V. (1), Caparrós-
Pérez E. (1), Teruel-Montoya R. (1), Delgado J. L. (2), Blanco J. E.
(2), Lozano M. L. (1), Antón A. I. (1), Vicente V. (1), Ferrer-Marín F.
(1,3), Rivera J. (1,3)
(1) Servicio de Hematología y Oncología Médica. Hospital Universitario
Morales Meseguer. Centro Regional de Hemodonación. IMIB-Arrixaca. Murcia.
(2) Servicio de Ginecología y Obstetricia. Hospital Universitario Virgen de la
Arrixaca. IMIB-Arrixaca. Murcia. (3) Grupo de Investigación CB15/00055. Centro
de Investigación Biomédica en Red de Enfermedades Raras (CIBERER). Instituto
de Salud Carlos III (ISCIII). Madrid
Introducción
: Los inmunoreceptores plaquetarios con do-
minios tirosina activadores (ITAM: glicoproteína VI [GPVI],
FcgRIIA, y CLEC-2) o inhibidores (ITIM: PECAM-1 o G6bB),
son relevantes en la función de las plaquetas en procesos fisio-
lógicos y patológicos como la hemostasia, integridad vascular,
inflamación, o separación de vasos linfáticos y sanguíneos. Las
plaquetas neonatales (PN) son, respecto a las de adulto (PA), in-
trínsecamente hiporreactivas frente a la mayoría de agonistas, por
mecanismos desconocidos. El papel de los receptores ITAM e
ITIM en esta hiporreactividad no ha sido explorado.
Métodos:
En muestras de sangre periférica de voluntarios
adultos y de cordón umbilical (n = 6), analizamos: 1) Expresión
cuantitativa de las GPs Iba, IIIa, Ia y VI, CLEC-2, PECAM-1 y
G6b por citometría de flujo (CF) (Platelet Gp Screen, Biocytex);
2) Niveles de GPVI y PECAM-1 en lisados plaquetarios por in-
munoblotting; 3) Función de receptores de agonistas solubles
(i.e
receptores de siete dominios transmembrana acoplados a
proteínas G o GPCR), y de receptores ITAM (GPVI, FcgRIIA y
CLEC‑2). Para ello medimos, por CF en sangre total diluida, la
secreción de selectina-P (CD62) y la unión de fibrinógeno a GPI-
Ib/IIIa, basalmente y tras estimulación con PAR-1 25 µM, PAR-4
250 µM, ADP 25 µM, CRP 5 µg/ml, CD9 5 µg/ml y rodocetina
100 nM, y 4) Señalización vía GPVI y CLEC-2, valorando la fos-
forilación de fosfolipasa C gamma 2 (PLCg2) y tirosin cinasa de
bazo (Syk), respectoa los niveles totales de PLCg2 y Syk, por
immunobloting fosfoespecífico (anti-PLCg2 P-Tyr1217, anti-Syk
P-Tyr525/526), en lisados de plaquetas activadas con CRP o ro-
docetina, agonistas de GPVI y CLEC-2, respectivamente (n = 3).
Resultados:
Las PN,
vs
. PA, mostraron niveles (moléculas/
plaqueta) significativamente reducidos de GP Ia (6.260 ± 1.262
vs.
7.861 ± 1.777,
p
= 0.003), pero no de las GPs IIIa y Iba.
Mientras la expresión de CLEC-2 y G6b no fue significativamen-
te distinta en PN y PA, si lo fue la de GPVI (5.421 ± 1.148
vs.
6.966 ± 929, p
= 0.004) y la de PECAM-1 (8.915 ± 1.394
vs.
11.496 ± 1.657, p = 0,001). Los ensayos de immunoblotting con-
firmaron la menor expresión de GPVI y PECAM-1 en PN (55 y
48%
vs.
PA, respectivamente, p < 0.05). Para todos los agonistas
ensayados, la unión de fibrinógeno fue significativamente menor
en PN que en PA (mediana de fluorescencia (MFI): 7 a 42%
vs.
PA, p < 0,05). También estaba reducida la secreción de selecti-
na-P en PN estimuladas con PAR1 (MFI: 85 ± 13,8
vs.
145,2 ±
49,8, p = 0,01), CRP (MFI: 55.8±30.2
vs.
150,3 ± 60, p = 0,03)
y rodocetina (MFI: 10,3 ± 8,8
vs.
48,7 ± 5,2, p = 0,01). En con-
sonancia, los ensayos de señalización mostraron una menor fos-
forilación de PLCg2 (P-Tyr1217) y Syk (P-Tyr525/526) en PN
estimuladas con CRP y rodocetina en comparación con PA.
Conclusiones:
Nuestro estudio revela diferencias signifi-
cativas en la expresión de receptores plaquetarios durante el
desarrollo. La expresión y/o funcionalidad de los receptores ITAM
(GPVI, FcgRIIA, CLEC-2) es distinta en PN respecto a PA, y esto
puede contribuir a la hiporeactividad plaquetaria neonatal. La dis-
minución simultánea de GPVI y PECAM-1 podría ser un meca-
nismo compensatorio para evitar una excesiva hiporectividad de
las plaquetas neonatales.
Financiación: ISCIII (PI14/01956) yCIBERER (CB15/00055)
CO-164
El receptor de inmunidad innata
TLR-4 participa en la internalización
por plaquetas de micropartículas
procoagulantes de origen plaquetario
López-Vílchez I., Hernández Garrido R. M., Molina Moreno P.,
Pino Ferrer M., Díaz-Ricart M., Escolar Albaladejo G.
(1) Servicio de Hemoterapia y Hemostasia. Hospital Clínic de Barcelona. Centro
de Diagnóstico Biomédico. Instituto de Investigaciones Biomédicas August Pi i
Sunyer (IDIBAPS). Universidad de Barcelona. Barcelona
Introducción:
Las plaquetas poseen propiedades endocíticas.
En estudios previos hemos demostrado que las plaquetas pueden
internalizar microvesículas ricas en factor tisular, lo que incre-
menta su reactividad frente a una superficie trombogénica. Hemos
investigado este proceso con micropartículas de origen plaqueta-
rio (PMP), que además de tener elevada actividad procoagulante,
pueden modular la activación de células inflamatorias como los
neutrófilos y exploramos la posible implicación de mecanismos de
inmunidad innata mediadas a través del receptor TLR-4.