107 / 210
Comunicaciones orales
107
Material y métodos:
Se desarrolló un algoritmo bioinformá-
tico para la automatización, a través del
software
Human Splicing
Finder, de la simulación del efecto en el procesamiento de intro-
nes de las 157 mutaciones
missense
y non-sense de
SERPINC1
descritas en la Human Gene Mutation Database. La validación
experimental de la predicción se realizó en dos mutaciones se-
leccionadas p.Lys254Arg y p.Lys157Arg. Generamos estas va-
riantes mediante mutagénesis dirigida en el plásmido que con-
tiene el cDNA de AT en contexto beta: pCEP4/AT-S137A, y las
expresamos en células HEK-EBNA. Los niveles proteicos, y la
capacidad anticoagulante se analizaron mediante western blot y
ensayos cromogénicos.
Resultados:
El algoritmo mostró que 7 de las 157 mutacio-
nes analizadas (4,5%) presentaban
scores
altos de creación o rup-
tura de sitios aceptores o donadores (> 85% probabilidad). Solo
una variante rompía de forma significativa un sitio aceptor natural
(p.Lys254Arg), las 6 restantes creaban sitios nuevos en el proce-
samiento de intrones (4 donadores y 2 aceptores). Para la vali-
dación experimental, seleccionamos las variantes p.Lys254Arg y
p.Lys157Arg por presentar los mayores
scores
de predicción de
afectación del procesamiento de intrones (90% y 88%, respecti-
vamente). Ambas mutaciones estaban ya descritas en pacientes
con deficiencia de AT tipo I, es decir sin proteína aberrante en cir-
culación. Sin embargo, las células HEK-EBNA produjeron y se-
cretaron ambas variantes al medio de cultivo con niveles similares
a la AT silvestre. Además, las dos variantes presentaron actividad
anticoagulante y formaban complejos trombina-antitrombina.
Conclusiones:
Nuestros resultados demuestran que los cam-
bios de aminoácidos p.Lys254Arg y p.Lys157Arg en la AT, des-
critos como mutaciones missense en exones del gen
SERPINC1
no interfieren en el plegamiento, secreción o funcionalidad de la
proteína. Por ello, la deficiencia tipo I de AT detectada en porta-
dores de estas mutaciones podría explicase por un procesamien-
to aberrante de intrones como apoyan también los resultados
in
silico
y por tanto, el cambio aminoacídico propuesto nunca se
produciría. Todo ello sugiere el cambio de la denominación de
estas mutaciones, de cambio missense (CM) a cambio de
splicing
(CS). Este estudio aporta nuevas evidencias de la trascendencia
que tiene un incorrecto procesamiento de intrones en el desarrollo
de la deficiencia de AT.
Financiación: PI15/00079 yCB15/00055 (ISCIII&FEDER);
19873/GERM/15 Fundación Séneca.
CO-155
Marcadores de netosis predicen el riesgo
de eventos cardiovasculares en pacientes
con fibrilación auricular anticoagulados
Arroyo Ana B., Valledor P., García Barberá N., Rivera Caravaca
J. M., Salloum Asfar S., Teruel Montoya R., Vicente V., Martínez
C., González Conejero R., Roldán V.
Centro Regional de Hemodonación. Hospital Morales Meseguer. Universidad de
Murcia-IMIB. Murcia
Introducción:
La trombogénesis en la fibrilación auricular
(FA) es multifactorial y no solo está relacionada con la estasis
en una aurícula izquierda debido a una contracción patológica.
La evidencia actual sugiere que la tendencia trombogénica en
la FA está relacionada con varios mecanismos fisiopatológicos
subyacentes. Los eventos adversos se presentan en un 4% de los
pacientes con FA con anticoagulación oral. Hay pocos datos so-
bre la información pronóstica de complicaciones trombóticas que
pueden proporcionar algunos biomarcadores plasmáticos en estos
pacientes. Recientemente, se ha descrito una relación entre la for-
mación de NET y la trombogénesis.
Objetivo:
Investigar el valor de los niveles de ADN (ADNdc)
y la actividad elastasa de neutrófilos en plasma como biomarca-
dor pronóstico de eventos cardiovasculares en pacientes anticoa-
gulados con FA.
Pacientes y métodos:
Incluimos 76 donantes sanos (40%
mujeres, edad media 67 ± 15) y 343 pacientes con FA < 75 años
(38% mujeres, edad mediana 69, rango 63-72) con una anticoagu-
lación estable (6 meses previos con INR = 2-3) y un seguimiento
de 6 años (mediana de 2639 días). Los eventos cardiovasculares
adversos se definieron como: combinado de eventos cardiovas-
culares (ictus previo, síndrome coronario agudo, edema agudo
pulmón); ictus; mortalidad global y mortalidad cardiovascular. El
ADNdc se cuantificó por fluorimetría (Sytox Green); la elastasa
mediante ELISA comercial (Abcam). Las relaciones de ADNdc/
AE /eventos se analizaron mediante regresión de Cox.
Resultados:
Previamente demostramos que el ADNdc au-
menta significativamente con la edad, por lo que seleccionamos
pacientes < 75 años. Durante el seguimiento el 15% sufrió un
combinado de eventos cardiovasculares, el 8% ictus y el 22%
falleció por alguna causa. Encontramos una correlación positi-
va y significativa entre el ADNdc y la elastasa (Rho Spearman
= 0,281; p < 0,001), por lo que solo esta última se utilizó en el
análisis estadístico. Los niveles de elastasa fueron mayores en FA
que en controles (mediana: 37,8 y 27,4 ng/ml, respectivamente)
(p < 0,001). En el análisis multivariado ajustado por la puntuación
CHA2DS2-VASc, la AE = 4.
o
cuartil se asoció con: combinado de
eventos cardiovasculares (p: 0,034; HR: 2,21; IC95%: 1,05-3,48),
ictus (p: 0,015; HR: 2,58; IC95% 1,20-5,52), mortalidad global
(p: 0,001; HR: 2,26; CI95%: 1,41-3,63) y mortalidad cardiovas-
cular (p: 0,040; HR: 4,58; CI95%: 1,07-19,61).
Conclusiones:
Entre los marcadores de NETosis analizados,
la elastasa no se correlaciona con la edad y puede proporcionar
información pronóstica específica para los eventos adversos en
los pacientes con FA, restando valor al ADNdc debido a su depen-
dencia de la edad. La validación de estos resultados en una pobla-
ción mayor abriría la posibilidad de implementar un marcador de
este tipo en la práctica clínica.
Financiación: RD12/0042/0050; ISCIII y FEDER
(P14/00253); Fundación Séneca 19873/GERM/15
CO-156
Microrna plasmáticos como biomarcadores
de riesgo de ictus en pacientes con
fibrilación auricular
Teruel-Montoya R. (1,2), Valledor P. (1,3), Arroyo A. B. (1,3),
García-Barberá N. (1,3), Rivera-Caravaca J. M. (1,3), Salloum-