156 / 210
XXXII Congreso Nacional de la Sociedad Española de Trombosis y Hemostasia
156
Las plaquetas de los pacientes con PTI tienen una mayor
superficie procoagulante con mayor capacidad para unir el com-
plejo protrombinasa (FXaVa) que el grupo control. Esto podría ser
un mecanismo procoagulante compensatorio que podría reducir el
riesgo de sangrado de los pacientes con PTI.
Ministerio de Economía y Competitividad. Fondo Europeo de
Desarrollo Regional. Unión Europea. PI15/01457
PC-433
Caracterización de las vesículas
extracelulares en un modelo experimental
de infarto de miocardio
Rodríguez J. A. (1), Orbe J. (1), Abizanda G. (2), Prósper F. (2),
Páramo J. A. (2), Roncal C. (1)
(1) Centro de Investigación Médica Aplicada. Universidad de Navarra. Pamplona,
Navarra. (2) Clínica Universidad de Navarra. Pamplona, Navarra
Introducción:
Las vesículas extracelulares (EV) son liberadas
a la circulación por todas las células del organismo en condiciones
fisiológicas y aumentan en condiciones patológicas. Están carga-
das con receptores, proteínas, microRNA, etc. de la célula u órgano
de procedencia y tienen la capacidad de transferir información
biológica a otras células diana. Por tanto, se pueden considerar
mensajeros intercelulares así como marcadores de activación y
daño celular y se ha propuesto que su determinación en circulación
podría representar un nuevo marcador de riesgo cardiovascular.
Objetivos:
a) determinar los cambios en el número y el origen
celular de las EV en un modelo experimental de infarto de miocar-
dio (IM) en ratón; y b) analizar
in vitro
la interacción de las EV de
origen cardíaco con el endotelio.
Métodos:
Se realizó un modelo experimental de IM en ratones
C57BL6/J por ligadura de la arteria coronaria descendente anterior
izquierda. Se determinó el número y origen celular de EV por
citometría de flujo, con anticuerpos frente a CD41 (plaquetas),
CD31 (células endoteliales), CD45 (leucocitos), TER119 (eritroci-
tos) y conexina-43 (cardiomiocitos) en plasma doble centrifugado
obtenido a nivel basal y 3, 15 y 30 días post-isquemia. In vitro,
se incubaron células endoteliales murinas (línea celular MS1) en
presencia de EVs producidas por cardiomiocitos murinos (línea
celular HL1), para estudiar su internalización por microscopía
confocal.
Resultados:
El número total de EV fue similar antes (806 ± 12
EV/mL) y después de isquemia (EV/mL: 741 ± 108 D3, 670 ± 84
D15, 704 ± 84 D30). No se observaron cambios en el número de
EV derivadas de leucocitos, plaquetas o eritrocitos a los distintos
tiempos post-infarto. Sin embargo, las EV endoteliales incremen-
taron un 50% a los 3 días post-isquemia y gradualmente volvieron
a nivel basal, mientras que las EV de cardiomiocitos aumentaron
un 35% a los 3 días, manteniéndose elevadas a los 15 días (216
± 16 EV/mL, p = 0.037) y disminuyendo a día 30 (200 ± 13 EV/
mL).
In vitro
, las células endoteliales MS1 internalizaron las EV
purificadas de los cardiomiocitos HL1.
Conclusiones:
El aumento temprano de las EV de origen car-
díaco y endotelial en la sangre circulante tras isquemia miocárdica,
y su progresivo descenso en estadios más tardíos, indica una libe-
ración dinámica de EV en respuesta al daño orgánico.
In vitro
, la
internalización endotelial de las EV derivadas de cardiomiocitos
sugiere que pueden tener una función fisiopatológica.
Fuente de financiación:
FIS (PI14/01152).
PC-434
Método modificado para evaluar la función
plaquetar por agregometría
Barreira R. (1,2), Patrício D. (1), Carvalho A. (2), Gabriel A. J. (2),
Simões A. T. (1), Oliveira A. C. (1), Fidalgo T. (1), Sevivas T. (1),
Salvado R. (1), Pego J. M. (1), Rodrigues F. (1), Ribeiro M. L. (1)
(1) Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra. Coimbra, Portugal. (2) Escola
Superior de Tecnologia da Saúde de Coimbra. Coimbra, Portugal
Introducción:
La agregometría, prueba estándar para diagnós-
tico de trastornos plaquetarios, es una técnica de difícil ejecución
e interpretación subjetiva por su considerable dependencia del
operador siendo de difícil normalización, en especial en los apa-
ratos más antiguos. Con el fin de aclarar trastornos plaquetarios,
su desenvolvimiento, ha adquirido, en los últimos años un carácter
perentorio. El desarrollo de pruebas más sencillas y con menos
dependencia del operador fundamental para obtener resultados
más objetivos y normalizados.
Objetivo:
Aplicación de nueva metodología, más fácil y fiable,
para análisis cuantitativo de las curvas de agregación plaquetaria.
Material y métodos:
Población 34 muestras: 14 controles y
20 pacientes con sospecha de trombopatía. Utilizamos: Analizador
CELL -DYN Sapphire
TM
para recuento de plaquetas (PLT), volu-
men medio plaquetar (MPV) y anisocitosis plaquetaria (PDW);
agregómetro, Dual Aggro - meterChrono -log
©
, para curvas de
agregación plaquetaria con agonistas: ristocetina (Rist), colágeno
(Col 2 mg/ml), ADP 5 y 10 µM, epinefrina (Epi 10 mM), ácido
araquidónico (AAR) 0,5 y 1,6 M y TRAP 25 M; software Digitize
it para analizar curvas de agregación, este programa proporciona
coordenadas para posterior transferencia a formato.csv. Integral
de Riemann en hoja de cálculo Excel (b1 + b2) / 2 * (A2 -A1) que
correlaciona tiempo con la agregación, para cálculo de área bajo la
curva (AUC). Programa GraphPad Prism 5 para análisis estadístico
(significación estadística p < 0,05).
Resultados:
Valores de referencia en
tabla I
. Diferencia
de medias: Control/pacientes AUC: Rist, t = 900, p = 0,053;
AAR0.5, t = 3600, p = 0,0121; AAR1.6, t = 880, p = 0,458;
ADP 5, t = 4700, p = 0,049; ADP 10, t = 3,900, p = 0,022;
EPI10, t = 3700, p = 0,024; TRAP, t = 1,900, p = 0,164; Col,
prueba t = 5600, p = 0,007. Valores de AUC inferior a 50% de los
valores de referencia fueron considerados alteración de función
plaquetaria: curva de agregación “anormal”. De todos pacien-
tes: 10 tuvieron valores AUC bajos (4 con solo 1 agonista y
6 con = 2). De 4 con respuesta reducida solo 1 agonista: 1 con
ristocetina, 3 epinefrina. Los 6 con respuesta reduzida con =
2 agonistas: 2 disminución con ADP y EPI, 2 disminución con
Col y EPI, 1 con disminución de AAR, ADP, EPI y Col y 1 con
respuesta anormal con todos, menos con ristocetina). Fueron
considerados normales 13 pacientes y anormales 7: 1 síndrome
de Bernard-Soulier, 5 defectos SPD / señal y 1 trombastenia de